在層析技術發展之初,對于一些物質的分離方式都處在比較原始的狀態,并且分離的結果也并不是很理想。
bio-rad專家談到層析技術最初是在1903~1906年由俄國植物學家M.Tswett首先提出來的。
那時,他將葉綠素的石油醚溶液倒入碳酸鈣管柱,并繼續以石油醚淋洗,由于碳酸鈣對葉綠素中各種色素的吸附能力不同,所以色素被逐漸分離,在管柱中出現了不同的色譜圖。于是就稱這種混合物的分離方法為,有色的圖譜法(Chromato+graphy),簡稱色譜法,又叫層析法。不過,當時這種方法并未引起人們的注意。
接下來隨著科學技術的發展以及生產實踐的需要,層析技術也得到了迅速的發展。這里就不得不提到兩位在層析技術發展史上做出重要貢獻的人,他們是英國生物學家馬?。?/span>Martin)和辛格(Synge)。是他們首先提出了色譜塔板理論。
色譜塔板理論其實是基于熱力學近似的理論,這個理論中涉及的對象有目標分離物,色譜柱。這里色譜柱好比是一個分餾塔。理論是這樣的:將目標分離物倒入“分餾塔”,這樣就會在分餾塔板間移動,在每一個塔板內組分分子在固定相和流動相之間形成平衡,隨著流動相的流動,組分分子不斷從一個塔板移動到下一個塔板,并不斷形成新的平衡。一個色譜柱的塔板數越多,則其分離效果也就越好。這個分離過程提升分離效率,并且定量的進行描述,分析這個分離過程。
這是個進步,并且馬?。?/span>Martin)和欣革(Synge)還提出更為遠見卓識的預言:1、流動相可用氣體代替液體,因為與液體相比,分離時候,物質間作用力更小,對分離也就更有好處。2、若能夠使用非常細的顆粒填料,并在色譜柱兩端施加較大的壓差,從而增加了理論培板數,這將會大大提高分離效率。
發展期
上世紀60、70年代是色譜/層析技術快速發展的時代,首先是層析介質有了飛速的發展,各種人工合成的介質出現,如硅膠、聚苯乙烯二乙烯基樹脂、瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等樹脂或凝膠的出現,極大地拓展了層析技術的應用領域和范圍,基于不同介質的層析方法也如雨后春筍般不斷涌現。